黄芪的薄层色谱荧光鉴别

为提高中药制剂研制水平和质量控制水平，制剂中的每一味药都应有专属性强的鉴别法。黄芪甲苷为黄芪的特征成分，因此黄芪甲苷的薄层鉴别成了黄芪及其制剂中黄芪的代表，《中国药典》1995，2000年版也正式给予法定，至今为止的科研报道、新药研制、医院制剂也都采用此方法。但在实际工作中我们发现，此法用于鉴别单味或药味少的复方制剂中的黄芪较合适，当用于药味较多的制剂时，存在明显的不足，表现为：黄芪甲苷的极性较大，在正相薄层色谱图中的Rf值较小，出现在斑点密集区，且与前后相邻成分不易分开；为使斑点可见，点样量一般要达拖尾，而拖尾却严重影响斑点的识别；制剂中黄芪以外的药味造成的背景干扰很大，特别是阴性对照品在此位置往往有斑点出现，干扰结果的正确判断。

我们通过大量实验发现一种以2个相对固定的荧光斑点构成的薄层色谱图，用此图谱鉴别黄芪以及含黄芪的复方制剂时，几乎不受其他药物的干扰，也不受点样量多而致的样品拖尾干扰，更适合于黄芪及有关制剂的鉴别。

1、实验材料

1.1 对照药材 内蒙黄芪（购自中国药品生物制品检定所）。

1.2 生药 黄芪（购自山西省太原市，为黄芪的冷冻干燥品，产地山西，由我室主任中药师俞明霞鉴定为内蒙黄芪Astragalus membrancus（Fisch.）bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao。膜夹黄芪 A.membrancus（南京中医药大学中康公司中药指纹图谱实验室提供）。

1.3 制剂 功血颗粒（本院制剂室生产，处方中有地黄、阿胶、女贞子、枸杞子子、黄芪等11味中药）；中汇糖脉康颗粒（中汇制药公司，批号200322，处方有黄芪、地黄、丹参、牛膝、麦冬、黄精等药物）；补中益气口服液（三九湖州药业有限公司，批号990812，处方有黄芪、党参、甘草、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮）。

1.4 试剂 正丁醇、碳酸氢钠、无水硫酸钠（CR级）。

1.5 薄层板 硅胶G预制板（青岛海洋化工厂）。

1.6 仪器 254nm紫外灯。

2、实验方法

2.1 内蒙黄芪和膜夹黄芪的荧光图谱

取内蒙黄芪、膜夹黄芪各2g，加水50mL回流提取1h，滤过，滤液用水饱和的正丁醇萃取（35mL×3），合并3次萃取液，以5％碳酸氢钠溶液洗涤（20mL×2），继续以水洗涤（20mL×2），无水硫酸钠吸收多余水分，回收正丁醇至干，残渣用1mL甲醇溶解，分别作为供试品液。取对照药材2g，按上述方法制备对照药材溶液。吸取上述溶液各5 uL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以甲醇-氯仿-水（15：65：5）的下层液为展开剂，上行展开，取出，晾干，置UV254 nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上，有2个相同的蓝色荧光斑点，其中蒙古黄芪的荧光斑点中，Rf值小为0．35的斑点较大且明亮，Rf值大为0．76的斑点较小；膜夹黄芪中2个斑点情况正好相反。如放置365nm下观察，上述荧光斑点仍然存在，但背景的荧光较强，斑点不甚清晰。

2．2制剂中黄芪的荧光色谱图

称取功血颗粒10g、中汇糖脉颗粒10g，加热水溶解，滤过，另取补中益气口服液30mL，分别按2．1项中的方法制得各制剂供试液。分别称取上述各制剂中除了黄芪外的药味制得它们的阴性对照品，并接同法制得阴性对照品溶液。分别吸取各制剂供试液。该制剂的阴性对照液、黄芪对照液点于同一块硅胶G预制板上，按2．1项中的方法展开，置UV254 nm 紫外灯下检视。各制剂的供试品色谱中，在与黄芪对照品色谱相对应的位置上，都有2个相同的蓝色萤光斑点，它们的阴性对照品对此均无干扰。从色谱结果可以辨定，制剂中黄芪均为内蒙黄芪。

3、结果和讨论

3．1 黄芪的2个荧光斑点中，内蒙黄芪中的Rf值较小斑点较大且明亮，膜夹黄芪中的正好相反，2个斑点的Rf值及它们之间的距离较适中，周围没有其他干扰斑点，构成了黄芪特有的、比较固定的色谱图。

3．2 黄芪荧光斑点清晰、干扰小的原风在于：正丁醇提取了样品中的中等极性部分；正丁醇提取液又经5％的碳酸氢钠洗涤，除去了大量含酚羟基的成分，如黄酮和其他酚性干扰物质；再经过特定的展开剂展开、分离；254nm紫外灯下观察，薄层板上原本存在的许多其他物质在此波长下不发荧光，一般不影响黄芪的荧光斑点观察，即使点样量很大，引起严重拖尾，也不干扰荧光斑点的观察，因而此图谱具有很好的重现性、专属性，能对结果作出很明确的判断；365nm下由于荧光物质太多，无法区别黄芪与其他干扰物质，不适合本品的观察。

3．3 本法重视性好、专属性强，如作为黄芪及其制剂中黄芪的特征鉴别，可提高中药制剂质量控制水平。