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药材及成方制剂显微鉴别法

浏览:292次 时间:2018-02-05 08:19:50

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显微鉴别系指用显微镜对药材的切片、粉末、解离组织或表面制片及成方制剂中药味的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择有代表性的样品,根据各该药材鉴别项的规定制片。成方制剂根据不同剂型适当处理后制片。


一、横切片或纵切片:选取药材适当部位,软化后用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可包埋后切片。


二、粉末制片:取粉末少量,置载玻片上,摊平,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它适当试液处理后观察。


三、表面制片:将样品湿润软化后,切取一部分或撕取其表皮,加适宜的试液观察。


四、解离组织片:如样品中薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在,可用氢氧化钾法;如果品坚硬,木化组织较多或集成较大群束,可用硝铬酸法或氯酸钾法。在解离前,应先将样品切成宽或厚约2mm的小条或片。


1.氢氧化钾法


置样品于试管中,加5%氢氧化钾溶液适量,加热至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去碱液,加水洗涤后,取出少量置载玻片上,用解剖针撕开,以稀甘油装置观察。


2.硝铬酸法


置样品于试管中,加硝铬酸试液适量,放置,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照1.法操作装置。


3.氯酸钾法


置样品于试管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸钾少量,缓缓加热,待产生的气泡渐少时,再及时加入氯酸钾少量,以维持气泡稳定地发生,至用玻璃棒挤压能离散为止,倾去酸液,加水洗涤后,照1.法操作装置。


五、花粉粒与孢子制片:取花粉、花药(或小的花朵)或孢子囊群(干燥样品浸于冰醋酸中软化),用玻璃棒捣碎,过滤于离心管中,离心,取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸(9∶1)的混合液1~3ml,置水浴上加热2~3分钟,离心,取沉淀,用水洗涤2次,加50%甘油与1%苯酚3~4滴,用品红甘油胶封藏观察。也可用水合氯醛试液装置观察。


六、细胞及细胞内含物等的测量:在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小,可用目镜测微尺测量。先将目镜测微尺装入目镜内,用镜台测微尺标化。标化时,转动目镜,移动镜台测微尺,使两种量尺的刻度平行,左边的“0” 刻度重合,再找第二条重合刻度。根据两条重合刻度间两种量尺的小格数,计算出目镜测微尺每小格在该物镜条件下所相当的大小(μm)。测量时,以目镜测微尺测量目的物的小格数,乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物镜下进行,但欲测量较长的如纤维、非腺毛等的长度时,则以在低倍物镜下测量较为方便。记录最大值与最小值(μm),可允许有少量略高或略低于药典规定的数值。


七、细胞壁性质的检定:


1.木质化细胞壁


加间苯三酚试液1~2滴,稍放置,加盐酸1滴,因木化程度不同,显红色或紫红色。


2.木栓化或角质化细胞壁


加苏丹Ⅲ试液,稍放置或微热,显橘红色至红色。


3.纤维素细胞壁


加氯化锌碘试液;或先加碘试液湿润后,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);显蓝色或紫色。


4.硅质化细胞壁


加硫酸无变化。


八、细胞内含物性质的检定:


1.玉米淀粉

(1)加碘试液,显蓝色或紫色。


(2)用甘油醋酸试液装置,置偏光显微镜下观察,未糊化的淀粉粒显偏光现象;已糊化的无偏光现象。


2.糊粉粒


(1)加碘试液,显棕色或黄棕色。


(2)加硝酸汞试液,显砖红色。材料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。


3.脂肪油、挥发油或树脂

(1)加苏丹Ⅲ试液,显橘红色、红色或紫红色。


(2)加90%乙醇,脂肪油不溶解


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